Journal de recherche sur le diabète et d'endocrinologie Libre accès

Abstrait

Euro Diabetes 2019 : Souris transgéniques HLA-DR3, DQ2 pour l'identification de peptides immunodominants d'autoantigènes pancréatiques - Rossino R - Università degli Studi di Cagliari

Rossino R

Contexte : Le diabète sucré de type 1 (ou diabète de type 1) est un type de diabète sucré qui résulte de la destruction par le système immunitaire des cellules bêta du pancréas qui délivrent l'insuline. L'absence d'agent hypoglycémiant qui en résulte stimule l'augmentation de l'aldohexose dans le sang. Les manifestations reconnues sont une augmentation de la soif, une augmentation de l'appétit, une miction régulière et une perte de poids. Le diabète de type 1 est identifié à partir du test des anticorps. Le test du peptide C, qui mesure la production endogène d'insuline, peut également être utilisé.

La régulation de l'insuline est essentielle à la survie. Le traitement à l'insuline doit être poursuivi sans interrompre les exercices de routine habituels. Les individus prennent généralement soin de leur diabète ; pour certains, c'est un défi. Le diabète non traité peut entraîner beaucoup de confusion. Les confusions graves comprennent l'acidocétose diabétique et l'état de transe hyperosmolaire non cétosique. Les complications de fin de journée connues sous le nom d'hyperglycémie comprennent les maladies coronariennes, l'insuffisance rénale, les ulcères du pied, les accidents vasculaires cérébraux et les problèmes visuels (maladies liées aux yeux). Des confusions peuvent survenir en raison d'un faible taux d'aldohexose causé par la prise d'un hypoglycémiant excessif.

Français : Objectifs : Les Sardes ont l'une des incidences de diabète sucré auto-immun insulino-dépendant (DT1) les plus élevées au monde (38/100 000 dans la tranche d'âge de 0 à 14 ans), associée à un faible degré d'hétérogénéité génétique et à une fréquence élevée de l'haplotype HLA-DR3-DQ2. Cet haplotype HLA confère un risque élevé de DT1, de maladie cœliaque et de sclérose en plaques. Les objectifs de l'étude sont : a) l'identification d'épitopes de cellules T immunodominants des autoantigènes pancréatiques préproinsuline et GAD65 immunisant les souris transgéniques HLA-DR3-DQ2 avec ces autoantigènes et dérivant des hybridomes spécifiques des cellules T et b) la conception de peptides variants de ces épitopes capables de se lier aux molécules HLA de classe II sans déclencher une activation des cellules T.

Méthodes. Des souris transgéniques HLA-DR3-DQ2, CD4 humaines, IA classe II KO triple dans le contexte NOD seront immunisées avec des autoantigènes humains PPI et GAD65 pour générer des cellules T spécifiques de l'antigène. Ces cellules seront fusionnées avec la lignée cellulaire BW5147 pour produire des hybridomes de cellules T et des réponses spécifiques des cellules T seront identifiées en stimulant les hybridomes avec des peptides chevauchants de PPI et GAD65 et en mesurant la production d'IL-2. PPI et GAD65 seront produits in vitro, purifiés et quantifiés afin d'immuniser chaque souris avec 100 μg d'antigène. Le pepscan des peptides 13 Mer chevauchants de PPI et GAD65 sera acheté auprès de la société Alphalyse.

Résultats : Dans le but d'améliorer la réponse des lymphocytes T et la génération d'hybridomes de lymphocytes T spécifiques de l'antigène, les souris transgéniques HLA-DR3-DQ2, initialement obtenues dans la C57BL/6, ont été rétrocroisées dans les souris NOD CD4 humaines KO de classe II. Ces animaux sont plus adaptés à l'immunisation car ils conservent le contexte d'auto-immunité des souris NOD (un modèle animal de T1DM humain spontané) en l'absence de molécules murines de classe II. À l'heure actuelle, ces animaux ont été obtenus et sont maintenus dans notre animalerie. De plus, le vecteur d'expression pour produire à la fois PPI et GAD65 a été généré.

Conclusions : La présente étude permettra d'identifier la partie la plus immunogène des autoantigènes pancréatiques PPI et GAD65 présentée par les molécules HLA, DR3 et HLA DQ2. Ces informations seront utilisées pour construire des peptides variants capables de se lier aux molécules HLA de classe II diabétogènes sans déclencher une activation des lymphocytes T, fournissant ainsi un éventuel vaccin peptidique contre le diabète de type 1.